PCR技术检测HIV病毒

    艾滋病检测，是指采用实验室方法对人体血液、其他体液、组织器官、血液衍生物等进行艾滋病病毒、艾滋病病毒抗体及相关免疫指标检测，包括监测、检验检疫、 自愿询问检测、临床诊断、血液及血液制品筛查工作中的艾滋病检测。PCR可用来追踪HIV的自然感染史。可在其它血清学和病毒学标志出现前检测病毒序列， 这样可判定无症状而且血清阴性患者潜在的HIV的传播性。

    PCR技术在HIV检测中的应用

    PCR可用来追踪HIV的自然感染史。可在其它血清学和病毒学标志出现前检测病毒序列，这样可判定无症状而且血清阴性患者潜在的HIV的传播性；可用 来监测长潜伏期（4～7年）病人，以及在抗病毒治疗期间病毒的水平；也可用于HIV-1血清阳性母亲的婴儿的HIV检测。在婴儿出生后初的6～9个月期 间，他们的血液中存在母体的抗体，因此用PCR可判定婴儿是否真正被HIV感染。

    1、血清抗体阴性病人的HIV序列的检测　　由于在感染HIV后到出现免疫反应之前有一段滞后期，这个血清学阴性的滞后期通常长达6周至6个月，而且 无抗体产生期可能更长些。在此期间受感染者往往检测不到抗体，因此，血清阴性的人也可能已感染HIV.PCR法在高危人群中检测到HIV-1比由血清学转 阳确诊的时间可以提高6个月。对少数初次共培养呈阴性的人，甚至可在血清转阳之前24～39个月就能确诊为HIV-1感染。对血清学试验结果不能确定者， 也可通过PCR作进一步分析和确诊。

    2、血清抗体阳性病人HIV序列的检测　　从血清阳性的HIV感染者的外周血单核细胞中可检测出前病毒序列。通过共培养分离出病毒的血清阳性的同性恋 男人血液制备的DNA，用PCR可100%检出病毒序列；用血清阴性共培养阴性同性恋者的标本，经PCR扩增检出病毒序列者为64%，血清阴性正常人标本 PCR检测也为阴性，表明未出现假阳性结果。由于HIV-1基因组的广泛的异源性，为提高检测的阳性率可采用多种引物（如LTR，gag和env基因的引 物）。利用PCR法从313份已证实为抗体阳性的标本中检测出310份HIV阳性（99%）。

    有人从AIDS或ARC病人的外周血单核细胞培养物，精液细胞和精液上清制备DNA。然后用PCR法和逆转录酶测定法分别检测HIV-1。PCR扩增 产物与32P标记的探针退火之后用BstNI消化。再进行聚丙烯酰胺凝胶电泳和自显影。结果表明，在逆转录酶阴性的28个细胞系中有9个以及用逆转录酶法 不能确定的9个细胞系中有2个为阳性。这说明过去许多细胞培养物认为是阴性者，实际上用更敏感的PCR测定时则为阳性。

    3、新生儿HIV序列的检测　　目前所使用的抗病毒药毒性大，因而不能用于HIV抗体阳性而未感染的婴幼儿。但当用PCR检测出HIV-DNA序列 后，即可进行抗病毒治疗以及加强免疫机能和营养的治疗。在一项研究中，14名血清阳性母亲的新生儿用PCR检测其中6个为阳性；在出生后12～15个月内 血清阴性的10个儿童中有5个为PCR阳性。从血清阳性母亲出生1个月的新生儿中，收集的外周血单核细胞经PCR检测，7个为阳性的婴儿，其中5个在检测 后10个月得AIDS;而PCR阴性的9个婴儿，在16个月的追踪检查期间身体状况良好。这些研究表明，PCR技术对被HIV感染母亲的新生儿和血清阴性 儿童进行早期的直接的HIV-1检测是十分重要的。

    HIV感染的母亲其婴儿由于母体抗体的存在，用抗体检测法通常为阳性。但实际上只有20%～60%的婴儿受到HIV感染。因此，对这些婴儿进行HIV 感染的早期诊断是十分重要的。现已证明30～50%的这些新生儿可在母亲的子宫里，在分娩和引产或通过产后哺乳时从其母体感染HIV.新生儿血清阳性者并 不能说明是HIV感染。因为母体HIV抗体可持续大约15个月之久。在一般情况下，婴儿并不表现出HIV感染的任何症状。病毒细胞培养法对婴儿并不是一种 可靠实用的方法；HIV特异IgM抗体的检测在母体抗体存在下也是不可能的；在过量血清抗体存在下检出血清中的HIV抗原也是十分困难的。另外，婴幼儿被 HIV感染后病情发展较快。早期诊断，对及时采取治疗措施，延缓阻止病情发展极为重要。

    PCR技术检测HIV-DNA序列对AIDS和ARC的确诊起着重要作用。但也有人认为 对已知HIV抗体、抗原或培养阳性的病人不必再做PCR。合适的PCR检测对象是那些疑有HIV感染但又缺乏确切的血清学依据的人群，如上述的HIV阳 性母亲所生的婴儿，阳性患者的性伴侣，静脉吸毒者和可疑的血清反应者。PCR技术还可用来检测血液制品及疫苗中有无HIV。